Guppy-befruktning skjer internt.
Hanner har en modifisert analfinne kalt gonopodium, som brukes til å overføre spermium til hunnfisken under paring. Gonopodium settes inn i hunnfiskens kjønnsåpning, og spermiet frigjøres. Hunnfisken lagrer så spermiet i kroppen sin til hun er klar til å frigjøre egg (ovulasjon).
Befruktning skjer når hannens spermium befrukter hunnfiskens egg inni kroppen hennes. De befruktede eggene utvikles inni hunnfisken og frigis til slutt som levende unger – en prosess kalt levendefødsel (vivipari).