Stor hornugle er en nattaktiv rovfugl, noe som betyr at de blir aktive om natten for å jakte og finne mat. De begynner typisk sin aktivitet rundt skumring og fortsetter jakten hele natten frem til gryning. De beboer skoger, skogmark og åpne marker, og bruker sitt kraftige syn og eksepsjonelle høre for å lokalisere bytte i mørket.