Hann- og hunnopossum parrer seg gjennom kloakkakontakt. Begge kjønn har en kloakka, en enkel åpning for fordøyelses-, urin- og reproduksjonssystemet. Under forspillet jakter og lukter hannen på hunnen og merker henne med duft. Når hun er modtagelig, senker hun kroppen og presenterer kloakken sin. Hannen justerer sin kloakk mot hennes, og hans rekte, gaffelte penis trenger inn for intern såoverføring. Etter parring skilles paret, og hunnen oppdrenger ungene alene. Oppossum har en svangerskap på bare 12 til 13 dager, og hunner kan få store kull flere ganger om året.